光学显微镜操作规范

第一次实验课的硬规矩。考试爱考”哪个动作是错的”，后续革兰氏染色还要用油镜。 来源：微生物-第2次课-光学显微镜（实验）

一、认镜头（考点）

	目镜	物镜
螺纹	无	有
倍数与长度	反比（越长倍数越小）	正比（越长倍数越大）
位置	上面，插在镜筒里	下面，装在转换器上

四个物镜用颜色圈区分：🔴 红 = 4× ｜ 🟡 黄 = 10× ｜ 🔵 蓝 = 40× ｜ ⚪ 白 = 100×（油镜）

总放大倍数 = 目镜倍数 × 物镜倍数

二、两个容易背错的参数

分辨率 = 能分辨两个相邻点的最小距离。距离越小，分辨率越高，越清晰。 ⚠️ 分辨率不等于放大倍数——放大倍数再高，分辨率不够，看到的只是一团模糊的大影子。

数值孔径（NA） 与介质的折射率直接相关：

• 空气 折射率 ≈ 1.0
• 香柏油 ≈ 1.5 ← 所以 100× 油镜要滴油，既放大又保清晰

机械筒长 = 160 mm：指取下目镜和物镜后，镜筒剩下的长度，是标准设计参数。

三、操作流程（照着做）

1. 取镜：一手握镜臂，一手托镜座
2. 通电，打开光源，调亮度
3. 把 4× 低倍物镜转入光路（听到”咔”一声到位）
4. 放装片：必须压在载物台通光孔正上方，用拨片夹固定
5. 载物台升到最高（眼睛看着物镜，别撞上）
6. 缓慢下降载物台，直到看到物像
7. 用细准焦螺旋微调清晰
8. 🚩 把目标移到视野中央，再换 10× → 40×
9. 需要 100× 时滴香柏油，换油镜

四、四条禁令（考试就考这个）

1. 🚫 不能手抓物镜转——必须握物镜转换器旋转，不然镜头会松脱摔坏
2. 🚫 除 4× 外禁止用粗准焦螺旋——10×、40× 下只能用细准焦，否则载物台升太快会压碎玻片、刮坏镜头
3. 🚫 换玻片前必须先转回 4×，拉开镜头与玻片的安全距离，再取片；不能直接抽拉玻片
4. 🚫 擦镜头只能用专用擦镜纸——纸巾、衣角、手指都会划伤镜片

补充：显微镜单台几千块，比手机贵，所有旋钮都要轻。

五、为什么”先移到中央再换高倍”（原理）

放大倍数上去，视野面积就变小。 低倍下目标在视野边缘，换到高倍时它已经跑到视野外了，于是你会以为”找不到了”。所以规则不是死记，是几何必然。

六、七类装片形态速记

微生物	镜下特征	备注
青霉	孔雀石绿染色呈绿色，帚状分支	真核霉菌
曲霉	褐色/紫色，形似蒲公英	真核霉菌
根霉	孢子长在孢子囊内（内生孢子）	重点看气生菌丝，别只看培养基里的营养菌丝
酵母菌	球形/椭球，可见出芽繁殖	真核
白色假丝酵母	能形成假菌丝	条件致病：口腔溃疡、阴道炎
细菌三型	球菌 / 杆菌 / 螺旋菌	个体小，要 40× 才清楚
放线菌	靠孢子丝繁殖	产抗生素（红霉素等）

七、装片（涂片）是怎么做的

菌液涂在载玻片中间 → 滴染色液 → 干燥 → 盖盖玻片 → 用树脂胶封边 → 可长期保存。 因为菌是”涂”上去的，所以装片也叫涂片。

八、本次课布置的作业

• 上传 2 张自己实拍的微生物观测照片到课程平台
• A3 纸微生物主题手抄报：画显微镜、培养箱、灭菌锅等器材 + 至少 2 种观测到的微生物 + 文字说明与专业/生活的关联；两周后交
• 预习教材 24–25 页（调焦系统、分辨率）